Развој поузданих и стандардизованих метода за тестирање осетљивости ројева комараца на инсектициде је кључан за разумевање ефикасности нових активних састојака или формулација. Методе за тестирање осетљивости ројева комараца на контактне инсектициде или производе (као што су они који се промовишу у програмима јавног здравља) су добро успостављене и стандардизоване. Међутим, методе тестирања испарљивих или аеросолних инсектицида који се користе у кућним производима тешко је ефикасно применити. На основу препорука Светске здравствене организације за кућне инсектициде, развили смо стандардизовану и високо ефикасну методу за тестирање аеросолних производа користећи комарце у кавезима и ефикасну методу дезинфекције спроведену у Пит-Грејди тест комори (ПГ тест комора). Валидирали смо ефикасност ове нове методе користећи популације комараца Aedes и Anopheles отпорних на инсектициде и осетљивих на њих. Нова карактеристика ове методе је укључивање коморе усмерене ка кавезима комараца, што омогућава квантитативну процену стопе убијања комараца у реалном времену након излагања инсектициду. Дезинфекција брисом ефикасно уклања резидуално аеросолно уље које садржи пиретроид са површине тест коморе, са стопом смртности мањом од 2% за осетљиве комарце тестиране директно на површини коморе. Није примећена просторна хетерогеност у стопама убијања или смртности међу комарцима у кавезима у ПГ комори. Наша метода са два кавеза пружа осам пута већи проток од методе слободног лета, омогућавајући истовремено тестирање различитих сојева комараца и ефикасну дискриминацију између осетљивих и отпорних популација комараца које се тестирају паралелно.
До данас, аеросолни инсектициди су првенствено коришћени у домаћинству за личну заштиту, са ограниченом употребом у програмима јавног здравља. Међутим, недавне студије су показале широко распрострањену употребу инсектицида у домаћинствима у подручјима где су болести које преносе вектори распрострањене. Без обзира да ли је мотивација репелент против комараца или превенција болести, постоји хитна потреба за стандардизованим и једноставним методама за скрининг ендемских популација комараца на осетљивост на кућне инсектициде. Ово је кључно за предвиђање ефикасности инсектицида против локалних вектора и разумевање како употреба инсектицида у домаћинству утиче на еволутивну селекцију отпорности на инсектициде.
Додатна метода 1 пружа детаљна упутства корак по корак за спровођење нашег програма тестирања аеросолних инсектицида.
Иако смернице СЗО препоручују употребу аутоматских небулизатора, оне не пружају конкретне техничке спецификације. Употреба аутоматских небулизатора је кључна, јер ручна небулизација у комори са пропилен гликолом није само радно интензивна, већ може изазвати и просторне недоследности и варијације у трајању небулизације.
Реакциона комора мора бити стерилисана након сваког теста, али метод унутрашњег чишћења који се препоручује у смерницама СЗО укључује наношење воде из црева. У нашем свакодневном раду, ова метода је најрадно најзахтевнији корак у руковању биоаналитичком опремом, па смо развили и тестирали поступак стерилизације заснован на брисеву.
Уклоњиви делови вентилатора се третирају као што је горе описано, а лопатице и оквир вентилатора се чисте сунђером натопљеним 5% раствором Декона 90.
На основу односа између трајања прскања и брзине испоруке производа, наш аеросолни распршивач је такође показао добру тачност у контроли односа дозе аеросола, барем у тестираном опсегу од 1 до 4 пута. Као што је приказано на слици 3б, ова карактеристика је посебно важна за карактеризацију односа доза-одговор нових формулација аеросола или одређивање идентификационе дозе за откривање резистенције на инсектициде.
Показали смо да је наш ревидирани протокол за процену кућних аеросол инсектицида, коришћењем дезинфекције брисевима, двоструких кавеза, даљински управљаних прскалица и биометријског снимања акционим камерама, ефикаснија и изводљивија алтернатива тренутним...СЗОпрепоруке. Метода дезинфекције брисом, која захтева само 20 минута, значајно штеди време у поређењу са постојећим протоколом (који обично захтева један сат по комори за тестирање). Такође смањује време које оператери проводе носећи комплетну личну заштитну опрему (нпр. респираторне кациге и антистатичку радну одећу). Штавише, ова метода генерише мање контаминиране течности и одеће за третман него потпуно чишћење коморе за тестирање, чиме се минимизира могућност контаминације просторије у којој се налази комора за тестирање. Метода дезинфекције брисом је такође погодна за дезинфекцију полутрајних просторија за тестирање које захтевајуминималнораспоред намештаја у различитим распоредима просторија.
Кључно питање истражено у овој и другим студијама је стандардизација доза изложености инсектицидима примењеним у животној средини у различитим протоколима тестирања. Као што је приказано на слици 2б, упркос фиксном трајању прскања, запремина прскања варирала је у зависности од типова аеросолних лименки, што потенцијално одражава разлике у производним процесима (нпр. унутрашњи притисак, употреба потисног горива, структура млазнице итд.). Штавише, тренутни недостатак комерцијално доступних уређаја за даљинско прскање са потребном флексибилношћу у трајању прскања ограничава њихову употребу у процени односа доза-одговор за сузбијање комараца. Ручно прскање кроз тест отворе или приступне отворе (ако су доступни) може довести до варијација у дозама изложености. У ствари, наши резултати истичу потребу и важност смањења ових извора варијација. Код резистентних популација Aedes aegypti, приметили смо корелацију између дозе аеросола и коначног одређивања осетљивости или отпорности (слика 3б). Идеално би било да дозе аеросола буду стандардизоване у грамима аеросолизоване супстанце, а не у трајању аеросолизације, како би се олакшала поређења између различитих студија.
RCAD нуди алтернативни приступ за будућа истраживања који минимизира утицај варијација процеса. Иако смо открили да стандардизација аеросолних спрејева није изводљива, показали смо да се маса аеросола која се испоручује кроз различите аеросолне лименке може репродуктивно проценити калибрацијом дужине прскања (слике 2б, 3а). Таква стандардизација концентрације аеросола у било којој тест комори је кључна за побољшање репродуктивности резултата.
На основу нашег искуства и искуства других истраживачких група, препоруке садржане у актуелним Смерницама у вези са употребом метода детекције аеросола за тестирање слободно летећих комараца представљају значајне логистичке изазове за лабораторијске и полутеренске студије. На пример, методе детекције слободно летећих комараца имају веома низак проток (укључујући радно интензивно поновно хватање преживелих слободно летећих комараца) и пате од бројних техничких ограничења, као што су потешкоће у одређивању стопе убијања у реалном времену.
Иако се наш валидирани експеримент са двоструким кавезом бави проблемом ограничења протока и представља изводљиву методу за скрининг осетљивости комараца на аеросолне инсектициде, треба напоменути да су стопе смртности комараца са Кајманских острва биле значајно ниже у експерименту са кавезом него у експерименту слободног лета (Сл. 5ц, Табела 1). Ова разлика може одражавати смањење дозе инсектицида унутар кавеза, јер мање капљица аеросола продире кроз мрежу и улази у кавез. Будуће студије би могле да користе тканине са већим мрежама и дизајн кавеза са већим брзинама протока ваздуха вентилатора (нпр. цилиндрични дизајни) како би се додатно потврдили резултати добијени различитим експерименталним методама.
Време објаве: 02. фебруар 2026.