Биљни и патогени материјали
Др. Пат Бровн са Универзитета Илиноис (сада УЦ Давис) обезбедио је мапирање популације сирка у вези са асоцијацијом познатом као популација конверзије сирка (СЦП).Раније је описано и представља колекцију различитих линија претворених у фотопериодну неосетљивост и мањи раст како би се олакшао раст и развој биљака у америчким срединама.У овом истраживању коришћено је 510 линија из ове популације, иако због лоше клијавости и других проблема са контролом квалитета, нису све линије коришћене у анализи сва три својства.Коначно, подаци из 345 линија су коришћени за анализу хитин одговора, 472 линије за флг22 одговор и 456 за ТЛС резистенцију.Б. цоокиеисој ЛСЛП18 је добијен од др Бурта Блума са Универзитета у Арканзасу.
МАМП мерење одговора
Два различита МАМП-а су коришћена у овој студији флг22, (Генсцрипт цаталог# РП19986) и хитин.Биљке сирка су узгајане у уметцима постављеним на равне површине испуњене земљом (33% Сунсхине Реди-Еартх Про Гровинг Мик) у стакленику.Биљке су заливене дан пре узимања узорака да би се избегла додатна влага у листовима на дан сакупљања.
Линије су рандомизиране и, из логистичких разлога, посађене су у серијама од 60 линија.За сваку линију су посађене три 'саксије' са два семена по линији.Наредне серије су засађене чим је претходна серија била обрађена док се не процени целокупна популација.Спроведена су два експериментална циклуса за оба МАМП-а са генотиповима поново рандомизираним у свакој од две серије.
РОС тестови су спроведени као што је претходно описано.Укратко, за сваку линију, шест семена је посађено у 3 различите саксије.Од добијених садница, три су одабране на основу униформности.Саднице које су изгледале необично или су биле знатно више или ниже од већине нису коришћене.Четири лисна диска пречника 3 мм су изрезана из најширег дела 4. листа три различите биљке сирка старе 15 дана.Један диск по листу две биљке и два диска једне биљке, при чему други диск постаје контрола воде (види доле).Дискови су појединачно плутани на 50 µл Х20 у црној плочи са 96 јажица, запечаћени алуминијумском заптивком да би се избегло излагање светлости, и држани на собној температури преко ноћи.Следећег јутра направљен је реакциони раствор коришћењем 2 мг/мл хемилуминисцентне сонде Л-012 (Вако, каталошки број 120-04891), 2 мг/мл пероксидазе рена (Тип ВИ-А, Сигма-Алдрицх, каталошки број П6782) и 100 мг/мл хитина или 2 μМ Флг22.50 ул овог реакционог раствора је додато у три од четири отвора.Четврти бунар је био лажна контрола, у коју је додат реакциони раствор искључујући МАМП.Четири празна бунара која садрже само воду су такође укључена у сваку плочу.
Након додавања реакционог раствора, луминисценција је мерена коришћењем СинергиТМ 2 мулти-детекционог читача микроплоча (БиоТек) свака 2 минута током 1 сата.Читач плоча врши мерења луминисценције свака 2 мин током овог 1 х.Збир свих 31 очитавања је израчунат да се добије вредност за сваки бунар.Процењена вредност за МАМП одговор за сваки генотип израчуната је као (просечна вредност луминисценције три експериментална бунара — вредност лажне бушотине) минус просечна вредност слепог бунара.Вредности празне бушотине су константно биле близу нуле.
Листови дискова одНицотиана бентхамиана, једна линија сирка са високим одзивом (СЦ0003) и једна линија сирка са ниским одзивом (ПИ 6069) су такође укључене као контроле у сваку плочу са 96 бунарчића у сврху контроле квалитета.
Б. цоокиеиприпрема инокулума и инокулација
Б. цоокиеиинокулум је припремљен као што је претходно описано.Укратко, зрна сирка су намочена у води три дана, испрана, сипана у коничне боце од 1Л и аутоклавирана сат времена на 15 пси и 121 °Ц.Зрна су затим инокулисана са око 5 мл мацерисаног мицелија из свеже културеБ. цоокиеиЛСЛП18 изолује и остави 2 недеље на собној температури, протресајући боце свака 3 дана.После 2 недеље, зрна сирка заражена гљивицама су осушена на ваздуху и затим чувана на 4 °Ц до инокулације на пољу.Исти инокулум је коришћен за читаво испитивање и сваке године је био свеж.За инокулацију, 6–10 заражених зрна стављено је у клупко 4–5 недеља старих биљака сирка.Споре произведене из ових гљива иницирали су инфекцију у младим биљкама сирка у року од недељу дана.
Припрема семена
Пре садње у пољу, семе сирка је третирано мешавином фунгицида, инсектицида и заштитног средства која садржи ~ 1% фунгицида Спирато 480 ФС, 4% фунгицида Себринг 480 ФС, 3% заштитног средства за семе Сорпро 940 ЕС.Затим се семе суши на ваздуху 3 дана, чиме се добија танак слој ове мешавине око семена.Заштитник је дозволио употребу хербицида Дуал Магнум као третман пре ницања.
Процена отпорности циљне пегавости на листовима
СЦП је засађен у Централној истраживачкој станици за усеве у Клејтону, НЦ 14-15. јуна 2017. и 20. јуна 2018. у рандомизованом комплетном блок дизајну са две експерименталне репликације у сваком случају.Експерименти су посађени у једноредове од 1,8 м са ширином реда од 0,9 м коришћењем 10 семена по парцели.Два гранична реда су засађена око периферије сваког експеримента да би се спречили ефекти ивица.Експерименти су инокулисани 20. јула 2017. и 20. јула 2018. године у ком тренутку су биљке сирка биле у фази раста 3. Оцене су узете на скали од један до девет, где су биљке које нису показивале знакове болести оцењене са девет и потпуно мртве биљке су оцењене као једна .Две оцене су направљене 2017. и четири читања у 2018. почевши две недеље након вакцинације сваке године.сАУДПЦ (стандардизована површина испод криве прогресије болести) је израчуната као што је претходно описано.
Време поста: 01.04.2021